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宫颈上皮内瘤变p16及Ki-67表达及其诊断价值

时间:2015-05-19 09:48来源:未知 作者:xdyy 点击:
基金项目: 清远市科技计划项目(编号:00154321320719038) 汪玉南进军尤海英: 连州市人民医院广东清远513400 冯晓冬徐炜: 广州金域医学检验中心有限公司广东广州513400 宫颈上皮内瘤变
基金项目: 清远市科技计划项目(编号:00154321320719038) 
汪 玉 南进军 尤海英: 连州市人民医院 广东清远 513400 
冯晓冬 徐 炜: 广州金域医学检验中心有限公司 广东广州 513400 

宫颈上皮内瘤变p16及Ki-67表达及其诊断价值

汪 玉 冯晓冬 南进军 徐 炜 尤海英
P16 AND KI-67 EXPRESSION AND DIAGNOSTIC VALUE OF CERVICAL INTRAEPITHELIAL NEOPLASIA 
WANG Yu, FENG Xiaodong, NAN Jinjun, et al 


  【摘 要】 目的  探讨宫颈上皮内瘤变p16及Ki-67表达及其诊断价值。方法  以我院2013年1月~2014年10月收治的80例宫颈上皮内瘤变患者为研究对象,其中CINI 28例,CINII 29例,CINIII 23例,选择同期行健康体检的30例正常宫颈组织人群为对照组,通过免疫组化技术对所有宫颈组织中的p16及Ki-67表达进行测定并比较。结果  CINI、CINII、CINIII p16阳性率分别为14.29%、48.28%、91.30%,均明显高于对照组的0.00%(p<0.05)。CINI、CINII、CINIII Ki-67阳性率分别为82.14%、93.10%、95.65%,均明显高于对照组的6.67%(p<0.05)。另外,p16、Ki-67阳性表达随CIN等级增高而上升。结论 p16、Ki-67表达可能参与宫颈上皮内瘤变发生、发展,两者联合测定可作为CIN分级诊断辅助手段。 
  【关键词】 宫颈上皮内瘤变 p16 Ki-67 诊断价值 
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.04.030 

  宫颈上皮内瘤变(CIN,即癌前病变)指的是子宫颈鳞状上皮从正常发展成癌的过程,为此早期诊断、治疗CIN对预防或减少宫颈癌变具有十分重要的意义[1]。目前临床上对宫颈上皮内瘤变诊断、分级主观因素(上皮组织残缺、病变累及腺体等)影响大,不利于临床诊治[2]。p16、Ki-67属于客观癌基因,对细胞周期直接作用,在细胞增殖、分裂、肿瘤生成中起参与作用,可作为CIN诊断的生物学标志[3]。基于此,本研究通过比较80例宫颈上皮内瘤变组织及30例正常宫颈组织中p16及Ki-67表达测定,以探讨p16及Ki-67表达在CIN中的诊断价值。报告如下。
     1 资料与方法
1.1 临床资料 以我院2013年1月~2014年10月收治的80例宫颈上皮内瘤变患者为研究对象,经宫颈活检、病理诊断确诊为CIN,年龄18~84岁,平均(46.3±2.1)岁。其中CINI 28例,CINII 29例,CINIII 23例。选择同期行健康体检的30例正常宫颈组织(轻微炎症、鳞状上皮基本正常)人群为对照组,年龄19~75岁,平均(45.2±2.5)岁,均知情并自愿参与本研究。试剂:包括p16鼠抗人单克隆抗体、Ki-67鼠抗人单克隆抗体及SP试剂盒。
1.2 方法 80例宫颈上皮内瘤变组织与30例正常宫颈组织均行免疫组化染色测定。操作如下:所有标本组织先用甲醛(10%)固定,常规石蜡包埋且连续切片,然后均行HE染色、SP免疫组化染色,光镜下观察,严格按照SP试剂盒指导说明书操作,PBS代替一抗为阴性对照,以已知阳性片为阳性对照。
1.3 判定标准 ①p16阳性判定。细胞核、细胞质中p16阳性表达,阳性信号为棕黄色、淡黄色或棕褐色颗粒,根据阳性细胞百分比及分布情况判断:单个细胞染色、阳性细胞数5%以下-阴性(-);散的细胞团染色、阳性细胞数5%~24%-弱阳性(+);片状细胞染色、阳性细胞数25%~50%-中度阳性(++);弥散细胞染色、阳性细胞数50%以上-强阳性(+++)。②Ki-67阳性判定。细胞核中Ki-67阳性表达,棕黄色颗粒(或细胞核、细胞质均为棕黄色),光镜下高倍视野4区计数200个细胞,根据染色阳性细胞判断:未着色-阴性(-);染色阳性细胞10%以下-弱表达(+);10%~30%-中度阳性(++);30%以上-强阳性(+++)。
1.4 统计学方法 SPSS16.0统计学软件对上述数据分析,计数资料率表示,2检验,多样本等级资料H秩和检验,p<0.05时差异有统计学意义。
     2 结果
2.1 两组宫颈组织中p16表达 宫颈上皮内瘤变组织p16阳性率均明显比对照组高(p<0.05),同时p16阳性率随CIN等级的增高而上升,各组CIN间p16阳性表达比较差异有统计学意义(H=122.90,p<0.01)。见表1。
2.2 两组宫颈组织中Ki-67表达 宫颈上皮内瘤变组织Ki-67阳性率均明显比对照组高(p<0.05),同时Ki-67阳性率阳性率随CIN等级的增高而上升,各组CIN间Ki-67阳性表达比较差异有统计学意义(H=142.72,p<0.01)。见表2。 

表1 两组宫颈组织中p16表达比较

(n) 

组别 阴性
(-)
弱阳性
(+)
中度阳性
(++)
强阳性
(+++)
阳性率
n(%)
CINI(n=28) 24 4 0 0 4(14.29)
CINII (n=29) 15 9 3 2 14(48.28)
CINIII(n=23) 2 4 8 9 21(91.30)
对照组(n=30) 30 0 0 0 0(0.00)

表2 两组宫颈组织中Ki-67表达比较

(n) 

组别 阴性
(-)
弱阳性
(+)
中度阳性
(++)
强阳性
(+++)
阳性率
n(%)
CINI(n=28) 5 19 3 1 23(82.14)
CINII (n=29) 2 9 15 3 27(93.10)
CINIII(n=23) 1 2 8 12 22(95.65)
对照组(n=30) 28 2 0 0 2(6.67)

3 讨论
     近年来宫颈癌呈现较高发病率、年轻化等特点。由于宫颈癌变由宫颈上皮内瘤变等发展而来,通常需数年,为此早期筛查出CIN,并采取针对性的治疗对降低宫颈癌发病率、病死率至关重要。同时CIN病变级别不同,具体治疗方案也不同[4],临床操作中受主客观多种因素影响,导致诊断结果片面或不准确,不利于临床治疗及预后。为此选择安全、准确性高的诊断方法具有十分重要的意义。
     目前临床常见癌基因包括p16、Ki-67等,其中p16基因属于多肿瘤抑制因子,于人染色体9p21中发现,是首个直接参与细胞周期素调控的抑癌基因,通过和细胞周期素D竞争结合细胞周期素依赖性激酶4以抑制细胞周期素D/依赖性激酶4复合物对细胞周期G1转化相关底物的磷酸化作用,抑制细胞进化(G1期→S期),进而达到阻止细胞增殖的目的[5-6]。目前较多肿瘤发生与p16突变、缺失或甲基化,致使p16基因抗癌功能失去,难以阻止细胞周期蛋白D与CDK4结合。国内外研究均认为p16是宫颈癌前病变检测的重要生物学标志,汪勤[7]等人研究表明p16、p53、Ki-67蛋白表达均和宫颈上皮内瘤变进展有关,CIN级别越高,上述三项指标表达越高,认为p16、Ki-67联合检测可作为CIN诊断、分级的重要辅助手段。本研究表1中可知相比正常宫颈组织,CIN组织p16基因阳性表达率明显更高(p<0.05),且CIN病变级别越高,p16阳性率越高(CINI、CINII、CINIII p16阳性率分别对应14.29%、48.28%、91.30%),呈正相关性,提示当CIN病变级别越高时,p16蛋白阳性表达则慢慢增强,与王昱洁[8]等人研究结果一致。Ki-67属于细胞增殖相关(细胞G1、S、G2、M期)一种核抗原,在增殖期细胞的细胞核中有所表达,具有半衰期短等特点,被当作细胞增殖活性反映的有效指标,且病例诊断中Ki-67是肿瘤细胞增殖的可靠标记[9]。大鼠实验表明Ki-67除了能与L428细胞株结合外,还能与其他多种细胞株的增生细胞核结合。Ki-67在人体增生细胞核中普遍存在,其表达高低在很大程度上直接反映肿瘤细胞增生活性及生物学行为,且起表达越高,肿瘤恶性程度越高,易发生侵袭、转移,进而预后质量越差[10]。本研究表2中可知CIN组织Ki-67阳性率均较高,不同病变级别Ki-67阳性率分别为82.14%、93.10%、95.65%,提示Ki-67阳性表达与CIN病变分级呈正相关性,与杨其昌[11]等人研究结果一致。
     综上所述,p16、Ki-67阳性表达与CIN病变级别正相关,联合检测有利于宫颈上皮内瘤变早期准确诊断、治疗及预后。

参考文献
[1] 文华清,耿源源,蔡金凤,等.p16和Ki-67蛋白在宫颈上皮内瘤变中的临床意义[J].临床肿瘤学杂志,2010,15(7):613-616.
[2] 刘 彤,崔 莉,许丽娟,等.p16、Ki-67蛋白表达及HPV检测在宫颈上皮内瘤变中的诊断意义[J].诊断病理学杂志,2009,16(5):343-345.
[3] 肖 兰.p16、Ki-67、MMP-2在宫颈疾病中的应用研究进展[J].医学综述,2014,20(18):3285-3286.
[4] 汪 勤,解正新,张卫琴,等.p16、p53和Ki-67蛋白在宫颈上皮内瘤变中的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志,2013,29(5):551-553.
[5] 田 琦,盂 刚.p16、ki-67在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变组织中的表达及临床意义[J].中国老年学杂志,2011,31(17):3378-3379.
[6] 张 燕,王 一,王建华,等.p16、Ki-67在440例宫颈病变中的表达及其病理诊断价值[J].诊断病理学杂志,2013,20(3):171-175.
[7] 黄惠英,钱德英,岑坚敏,等.免疫组化P16蛋白在不同级别宫颈病变中表达差异的研究[J].现代医院,2008,8(3):14-15.
[8] 王昱洁,王言奎,王箴言,等.宫颈上皮内瘤变组织NDRG1、P16和Ki-67蛋白表达及意义[J].齐鲁医学杂志,2012,27(5):392-394.
[9] 周卫强.Survivin、P16<'INK4a>、COX-2、Ki-67在宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌中的表达及临床意义[D].苏州大学,2010.
[10] 詹 锋,刘晓颖,荣卡彬,等.蒲公英提取物对MKN-45胃癌细胞株P53和Ki67表达的影响[J].现代医院,2012,12(5):20-21.
[11] 杨其昌,朱 燕,刘宏斌,等.宫颈上皮内瘤变p16INK4a和p53及Ki-67表达及其诊断价值探讨[J].中华肿瘤防治杂志,2011,18(16):1255-1258.

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