本刊由广东省医院协会主管主办
您现在的位置: 主页 > 专业技术篇 > 医技诊疗 >

HBeAg阴性慢性乙肝患者乙肝病毒大蛋白检测研究

【】2015-05-19 点击次数
伍尚剑 陈聚兴 谭宗宪 莫夏鹰 陈绍轩 欧学骞 :怀集县人民医院 广东怀集 526400 

HBeAg阴性慢性乙肝患者乙肝病毒大蛋白检测研究

伍尚剑 陈聚兴 谭宗宪 莫夏鹰 陈绍轩 欧学骞
SIGNIFICANCE OF HBV-LP IN PATIENTS WITH CHRONIC HEPATITIS B 
WU Shangjian, CHEN Juxing, TAN Zongxian, et al 


  【摘 要】 目的  通过检测HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清中乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)和HBV-DNA,探讨HBV-LP与HBV-DNA的关系,研究HBV-LP反映HBV复制情况的可靠性,揭示HBeAg阴性慢性乙肝患者检测HBV-LP的临床意义。方法  用酶联免疫吸附试验(ELISA)对HBV-LP和HBeAg进行检测;采用荧光定量PCR方法对HBV-DNA进行检测。结果  106个HBeAg阴性慢性乙肝患者HBV-DNA、HBV-LP的检测结果显示: HBV-LP的检测结果与HBV-DNA的检出结果差异无统计学意义(p>005)。HBV-DNA拷贝数的对数值与HBV-LP含量具有正相关关系,相关系数r=0.901。结论 HBV-LP能够反映出乙肝病毒的复制情况,血清中的HBV-LP与HBV-DNA具有较好的相关性,是反映HBeAg阴性乙肝患者病毒复制情况的新的血清免疫学指标。 
  【关键词】 慢性乙型肝炎 病毒 诊断 大蛋白 

  【Abstract】 Objective  To explore the relationship between HBV-LP and HBV DNA, to study the reliability of HBV-LP reflecting HBV replication and to discover the clinical significance of detecting HBV-LP in HBeAg negative CHB patients by examing HBV-LP, HBV-DNA in sera of HBeAg negative in CHB patients. Methods  HBV-LP and HBeAg were detected by ELISA while HBV-DNA by quantitative fluorescent PCR. Results  HBV-LP of 106 CHB patients were not statistically different from HBV DNA(p>0.05) . The HBV DNA of different HBV M patterns had no statistical significance from HBV-LP(p>0.05) at the same time. And the logarithmic value of HBV DNA copies correlated with contents of HBV-LP(r=0.917). Conclusion HBV-LP, which might reflect HBV replication and correlated closely with HBV-DNA, would be a novel immuno-serological index that might probably reflect the HBV replication of HBeAg negative CHB patients.
     【Key words】  chronic hepatitis B(CHB);virus; diagnosis; large surface protein( HBV-LP) 
     【Author′s address】 Huaiji people's hospital, Zhaoqing, Guangdong, 526400, China
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.04.033 

  我国慢性乙型肝炎患者约占世界的1/3[1],慢性乙型肝炎患者的治疗效果监测指标主要有 HBeAg阴转和HBV -DNA阴转以及临床肝功能改善等,目前HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者较多并且暂时没有有效监测指标。近年来研究表明,HBV-LP具有反式激活 HBV 细胞内复制的功能,与 HBV感染、病毒复制及预后均具有密切关系[2],对HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者的疗效监测具有一定的临床意义。现对106例HBeAg阴性的慢乙肝患者血清HBV-LP、HBV-DNA 进行分析比较,旨在探讨将HBV-LP用于反映HBeAg阴性的慢乙肝患者HBV复制程度的可靠性以及其疗效监测的意义。现将结果报道如下:
     1 对象与方法
1.1 对象 选取106例于2013年1月~2014年9月期间在我院就诊的HBeAg阴性慢乙肝患者,其中男62例,女44例。年龄18~63岁,平均年龄39.6岁。所选取的病例均符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的“病毒性肝炎防治方案”中的慢性乙肝病毒性肝炎诊断标准。
1.2 检测方法 HBV-DNA实时荧光聚合酶反应(PCR)定量检测试剂盒,在ABI7500 型 荧光定量 PCR仪上进行检测;HBV-LP检测试剂盒,cu-t off 值为0.105。严格按照仪器和试剂说明书操作进行。结果判断按照HBV-LP 检测OD值>0.105者为阳性,HBV-DNA>103 IU/ml为阳性进行统计。
1.3 统计学分析 采用SPSS 17.0软件进行统计,计量资料组间差异采用2检验,计数资料组间差异采用方差分析。
2 结果
2.1 106例 HBeAg 阴性慢乙肝患者的HBV-LP和HBV-DNA的总阳性率 分别为67.9%(72例)和72.6%(77例),二者的检出率无明显差异, 现就HBV-LP及 HBV-DNA的相关性进行比较,见表1。 
 表1 实验组中HBV-LP及 HBV-DNA的相关性比较

(n) 

HBV-LP HBV-DNA阳性 HBV-DNA阴性
阳性 52 20
阴性 25 9
合计 77 29
 注:相关性检验显示HBV-DNA与 HBV-LP之间存在正相关关系(r=0.628,p<0.05) 
2.2 HBV-DNA拷贝数对数值与HBV-LP阳性率之间的比较 见表2。 

表2 106例HBeAg阴性的慢性乙肝患者血清标本
HBV-DNA拷贝数与HBV-LP阳性率比较

 

HBV-DNA
拷贝数(IU/ml)
HBV-DNA
阳性例数(n)
HBV-LP
阳性例数(n)
HBV-LP
阳性率(%)
103 14 12 85.7
104 9 8 88.9
105 10 9 90
106 13 12 92.3
107 17 17 100
108 14 14 100
合计 77 72 93.5
 注:106例HBeAg阴性的慢乙患者血清标本中的HBV-DNA拷贝数对数值与HBV-LP阳性率的相关系数r=0.921 ,表明HBV-DNA拷贝数的对数值与HBV-LP阳性率具有相关性 
3 讨论
     目前我国慢性乙肝患者中HBeAg阴性者较多并且比例呈明显上升趋势,尤其在肝硬化患者中HBeAg阴性高达60%以上[3], 其原因可能为HBV基因前C区或CP存在变异导致HBeAg合成障碍[4]和近年普遍使用抗病毒治疗而引起。慢乙肝患者的疗效监测指标主要有 HBeAg阴转和HBV -DNA阴转以及临床肝功能改善,但是对于HBeAg阴性的慢性乙肝患者除HBV-DNA外,暂时未有反映HBV复制程度的标志物或者疗效监测的指标,在临床上表现为HBeAg呈阴性而 HBV-DNA仍为阳性的情况较为多见,即血液中HBeAg虽为阴性但HBV仍有高水平、持续的再复制[5]。显然HBeAg阴性并不能作为判断HBV复制终止的理想依据。乙肝病毒S基因编码的表面大蛋白(Hepatitis B Virus Large Surface Protein ,HBV-LP)在空间上具有2种不同的跨膜构象,作为HBV的包膜蛋白,内侧可以和HBV核壳体膜结合,外侧可与病毒受体结合,是HBV颗粒成熟包装的关键[6],检测HBV-LP对于慢乙肝患者的HBV –DNA复制情况和抗病毒治疗的疗效监测以及病情预后判断有一定的意义。
     本研究结果表明106例 HBeAg 阴性慢乙肝患者的HBV-LP和HBV-DNA的总阳性率分别为67.9%(72例)和72.6%(77例),二者的检出率无明显差异, HBV-LP 与HBV-DNA 之间存在正相关关系(r=0.628,p<0.05)。在106例 HBeAg 阴性慢乙肝患者中,HBV-DNA为阴性而HBV-LP仍有18.9%的阳性检出率,导致上述结果的原因可能为:①长期抗病毒治疗导致病毒基因变异可能造成HBeAg合成障碍血清,因而HBeAg的阴性结果不能说明乙肝病毒没有处于复制状态[7-8];②有研究表明,血清HBV-DNA水平较低或HBV-DNA检测敏感度有限时,肝脏内仍旧可以存在一定量的HBV-DNA在持续复制,所以血清HBV-DNA阴性同样不是一定表明患者体内的HBV完全清除或不处于复制状态;③抗病毒药物只对病毒cccDNA的再复制有抑制作用,对已形成的病毒表达蛋白并无抑制作用,即以DNA为模板的转录和病毒蛋白的转译表达不受影响[3],故肝内存在较多的cccDNA时可以导致血液中HBV-DNA检测阴性而HBV-LP检测呈阳性反应。综上所述,对于HBeAg 阴性慢乙肝患者来说,通过HBV-LP检测可了解体内病毒的复制、疾病进展情况以及抗病毒疗效与预后判断[9-11],,可以弥补HBV-DNA检测对HBeAg 阴性慢乙肝患者患者抗病毒治疗终点判断及疗效评估中的不足,可以避免不必要的停药反跳,具有更好的临床指导意义,以减少更为严重的肝硬化及肝癌的情况发生。
     另外基于HBV -LP 的反式激活病毒复制功能, 这提示仅靠检测HBV DNA来评估抗病毒治疗效果以及判定疗效方面可能存在一定的局限性, 需要结合HBV-LP和HBV-DNA两者的检测结果以便对抗病毒治疗效果作出准确评估,本组研究资料表明, HBV-LP能反映HBV复制情况, 在106例 HBeAg 阴性慢乙肝患者中 HBV-LP含量与HBV-DNA拷贝数具有较好相关关系(r=0.921) ,即患者感染血清中HBV -LP与H BV-DNA检测阳性率有较高的符合率, 且HBV DNA拷贝数越高, HBV -LP 阳性率越高, 表明HBV-LP阳性检出是反映乙肝患者体内病毒复制情况的有效指标,这与国内学者的研究有相似点[12-14],但是HBV-LP的残留与病毒持续复制或乙肝病毒慢性持续性感染相关性,有待进行进一步的深入研究。
     综上所述,笔者认为检测血清HBV-LP 可作为监测HBeAg阴性的乙型肝炎患者体内病毒复制、疾病进展及抗病毒治疗效果具有积极意义。

参考文献
[1] 梁晓峰,陈园生,王晓军,等.中国3岁以上人群乙型肝炎血清流行病学研究[J].中华流行病学杂志,2005,26(9):35-38.
[2] 乐爱平,鞠北华,王文,等.乙型肝炎病毒大蛋白检测在乙型肝炎诊治中的临床意义[J].世界华人消化杂志,2006,14(16):1578-1581.
[3] BRUNS M, MISKA S , CHASSOT S, et al. Enhancement of hepatitis B Virus infection by non-infections subviral particles[J]. J Virol,1998, 76: 1462-1468.
[4] HAMASAKI K, NAKATA K , NAGAYAMA Y, etal. Changes in prevalence of HBeAg-negative mutant hepatitis B virus during the course chronic hepatitis B[J]. Hepatology, 1994, 20: 8-14.
[5] 贾继东. 乙型肝炎e抗原阴性慢性乙型肝炎的治疗[J]. 中华肝脏病杂志,2005, 13(7): 539.
[6] BRUSS V, VIELUF K. Functions of the internal Pre-S domain of large surface protein in Hepatitis B virus Particle Morphogenesis [J]. J Virol, 1995, 69(11) : 6652-6657.
[7] 刁奇志,王贵学.HBVDNA 与 Pre-S1 抗原均阳性患者 HBeAg 阴性的原因探讨[J].临床检验杂志,2006,24(5):346-347.
[8] 陈应华,肖 燕,李 佳,等.HBsAg 阴性血清模式与HBV DNA 的关系及临床意义[J].遵义医学院学报,2010,33(4):344-345.
[9] 吴 潇,张伟民.乙型肝炎患者乙肝病毒大蛋白检测与HBVDNA的关系[J].浙江检验医学,2007,5(3):11-13.
[10] 赵碎娟,孙根妹,郑明波.HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗中血清表面抗原大蛋白水平与乙型肝炎病毒核酸之间的关系[J].中国卫生检验杂志,2010,20(4):818-820.
[11] 梅晓莉.慢性乙型病毒性肝炎的治疗研究进展[J].临床和实验医学杂志,2009,8(2):131-133.
[12] 魏红山, 黄玉波, 宋淑静, 等. HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清LHBs水平与HBV DNA 之间的关系[J]. 中华肝脏病杂志, 2006, 14(7) : 543-544.
[13] 孙 颖, 辛绍杰, 雷 厉, 等. 乙肝病毒外膜大蛋白检测对于判定HBV DNA 复制的意义[J]. 世界华人消化杂志, 2006, 14(3): 354-357.
[14] 吴正林, 刘 玢, 肖桂初, 等. 乙型肝炎病毒表面大蛋白与HBVDNA检测的对比研究[J]. 中华实验诊断学, 2007, 11(4) :479-481.

版权与免责声明:

① 本网版权均属于现代医院杂志社,转载、摘编应在授权范围内使用,应注明"来源出处:《现代医院》杂志社"。违者本网将追究相关法律责任。

② 如有疑问和问题请联系现代医院杂志社服务热线:020-83310901 83310902

推荐文章:
优质高效低耗管理在升华

优质高效低耗管理在升华

优质高效低耗管理在升华 访清远市人民医院周海波院长 梁若柽 冯濂波 陈星伟 林春艳......

保健医疗双翼并举 老“三甲”焕发新活力

保健医疗双翼并举 老“三甲

保健医疗双翼并举 老三甲焕发新活力 访珠海市妇幼保健院吕简承院长 本刊记者 林春艳......

过刊回顾

下载排行

网站最新